WASP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423693

Descripción general

Mouse Was codifica la proteína del síndrome de Wiskott–Aldrich (WASP), un regulador específico del sistema hematopoyético de la remodelación del citoesqueleto de actina que conecta la señalización proximal al receptor con la polimerización ramificada de actina impulsada por Arp2/3. WASP integra señales de las GTPasas de la familia Rho y de la señalización por fosfoinosítidos para coordinar la migración, la adhesión, la fagocitosis y la organización de la sinapsis inmunológica en las células inmunitarias. A través de estas funciones, WASP influye en procesos como la endocitosis, el tráfico vesicular y las respuestas transcripcionales aguas abajo de los receptores inmunitarios. La actividad desregulada de WASP se asocia con fenotipos de disfunción inmunitaria y ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar la señalización dependiente del citoesqueleto en la biología de los leucocitos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO WASP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Was en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Was junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Was tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína WASP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Was para la investigación de la señalización de WASP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Was críticos para la función de WASP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Was para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido WASP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido WASP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Was. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR WASP (m) y el plásmido HDR WASP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Was para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Was definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.