VWA5B2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406578

Panoramica

VWA5B2 codifica una proteina contenente un dominio di tipo von Willebrand factor A (VWA), un motivo modulare spesso coinvolto in interazioni proteina–proteina che supportano l’organizzazione della matrice extracellulare, la segnalazione legata all’adesione e l’architettura tissutale. Sebbene VWA5B2 sia caratterizzata in modo meno esteso rispetto a molte proteine con dominio VWA, la sua composizione di domini prevista suggerisce ruoli nell’ancoraggio o nella funzione di scaffold di complessi che influenzano l’adesione cellulare, la motilità e la meccanotrasduzione. Un’alterata regolazione dei processi di adesione e associati alla matrice è spesso collegata a un controllo della crescita deregolato e a fenotipi invasivi, rendendo VWA5B2 un bersaglio utile per studiare le vie che mettono in relazione le interazioni cellula–matrice con l’espressione genica e le dinamiche del citoscheletro. La perturbazione genetica di VWA5B2 può quindi aiutare a definirne il contributo a risposte allo stress dipendenti dal contesto e al rimodellamento delle reti osservato in stati cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VWA5B2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VWA5B2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VWA5B2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VWA5B2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VWA5B2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VWA5B2 per lo studio della segnalazione di VWA5B2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VWA5B2 critici per la funzione di VWA5B2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VWA5B2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VWA5B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VWA5B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VWA5B2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VWA5B2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VWA5B2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VWA5B2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VWA5B2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.