Plásmido CRISPR de Activación (h) VRL-1: sc-401648-ACT

TRPV2 (VRL-1) codifica un canal catiónico no selectivo permeable a Ca2+ de la familia de receptores potenciales transitorios vaniloides, que funciona como un sensor polimodal de señales químicas y mecánicas. VRL-1 participa en la entrada de calcio inducida por estímulos, lo que influye en la excitabilidad de la membrana, la remodelación del citoesqueleto, el tráfico vesicular y programas de transcripción en contextos inmunitarios, neuronales y epiteliales. A través de redes de señalización dependientes de calcio, TRPV2 se ha relacionado con procesos que incluyen la activación y la fagocitosis de macrófagos, el crecimiento de neuritas y la adaptación celular a situaciones de estrés. La actividad o expresión desregulada de TRPV2 se ha asociado con fenotipos inflamatorios y se ha explorado en investigación oncológica y cardiometabólica como modulador de la migración celular, la señalización de supervivencia y la remodelación tisular.

VRL-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRPV2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

VRL-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRPV2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRPV2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de VRL-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRPV2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de VRL-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía VRL-1 en células tumorales con expresión de TRPV2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.