Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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VPS35 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-402019-NIC
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- VPS35 Double Nickase Plasmid (h) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
- 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
- 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
- VPS35 더블 니케이스 플라스미드 (h) 및 VPS35 더블 니케이스 플라스미드 (h2)는 VPS35을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 VPS35 Antibody (B-5): sc-374372
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
VPS35 더블 틈내기효소 플라스미드 (h) | sc-402019-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
VPS35 더블 틈내기효소 플라스미드 (h2) | sc-402019-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VPS35는 엔도좀에서 골지체로의 회수(endosome-to-Golgi retrieval)와 막관통 단백질의 엔도좀 재활용을 조율하는 레트로머(retromer) 화물 선택 복합체의 핵심 구성요소를 암호화한다. VPS35는 소팅 넥신(sorting nexin) 및 WASH 의존적 액틴 재구성과의 결합을 통해 수용체 수송, 리소좀 항상성, 그리고 재활용 경로와 분해 경로 사이의 균형을 조절하는 데 기여한다. VPS35 기능이 손상되면 엔도-리소좀 동역학과 단백질 항상성(proteostasis)이 교란되어, 세포 표면과 분비 경로 내 막단백질 조성이 영향을 받는다. 유전학적·기능적 연구들은 변화된 VPS35 활성이 신경퇴행성 기전과 연관됨을 보여주었으며, 특히 시냅스 유지, 미토콘드리아 품질 관리, 단백질 응집 취약성으로 수렴하는 경로들이 강조된다.
VPS35 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 VPS35 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 VPS35 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 VPS35의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.
편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, VPS35 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.