von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400217

概要

VWFは、主として血管内皮細胞および巨核球で合成され、Weibel–Palade小体と血小板α顆粒に貯蔵される、大型の多量体性糖タンパク質であるvon Willebrand因子をコードする。VWFは高いずり応力下で露出した内皮下コラーゲンへの血小板の捕捉（テザリング）と接着を仲介し、循環中で凝固第VIII因子を安定化させることで、一次止血と凝固カスケードを結び付ける。調節された分泌と、ADAMTS13による多量体プロセシングは、血栓形成の動態および血管恒常性に影響を及ぼす。VWFの量、多量体組成、あるいはクリアランスの異常は、先天性および後天性の出血・血栓性表現型と関連しており、内皮生物学と止血バランスを研究するうえでの重要な結節点となっている。

von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVWF遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VWF内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VWFのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、von Willebrand Factor/VWFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、von Willebrand Factor/VWFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VWF欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• von Willebrand Factor/VWFの機能に不可欠なVWFエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VWFゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびvon Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VWF遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  von Willebrand Factor/VWF HDRプラスミド（h）および von Willebrand Factor/VWF HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVWFホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVWF標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。