Plasmide Double Nickase (m) Vimentin: sc-423676-NIC

Vim code pour la vimentine, une protéine de filament intermédiaire de type III qui organise le réseau du cytosquelette et contribue au maintien de la forme cellulaire, de l’intégrité mécanique et du positionnement des organites dans les états cellulaires mésenchymateux et migratoires. La vimentine se remodèle de façon dynamique lors de la division, de la migration et de l’adhérence cellulaires, en interagissant avec l’actine et les microtubules et en intégrant des voies de signalisation impliquées dans la transition épithélio-mésenchymateuse, la réparation des plaies et les réponses inflammatoires. Dans des modèles murins, une expression altérée de la vimentine ou une organisation anormale de ses filaments est associée à des modifications du trafic des cellules immunitaires, au remodelage lié à la fibrose et à des phénotypes liés à la métastase, faisant de Vim un nœud pertinent pour étudier les interactions entre cytosquelette et signalisation. Sa large expression dans les compartiments stromal et immunitaire soutient également des travaux sur l’architecture tissulaire et la régulation par le microenvironnement.

Vimentin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Vim dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Vim. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Vim. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Vim.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.