VILIP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401100
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- VILIP-1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico VILIP-1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:VILIP-1 Anticorpo (2F1-E3): sc-293209
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
VILIP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401100 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O VSNL1 codifica a proteína 1 semelhante à visinina (VILIP-1), um sensor neuronal de cálcio da família EF-hand que sofre alterações conformacionais dependentes de Ca2+ e associação à membrana mediada por um “switch” de miristoilação. A VILIP-1 acopla transientes de cálcio intracelular à regulação da transdução de sinais, influenciando vias ligadas a cAMP/cGMP, a plasticidade sináptica, o crescimento de neuritos e a expressão gênica dependente de atividade. Em tecidos humanos, é enriquecida no sistema nervoso e é comumente utilizada como marcador do estado neuronal e da dinâmica da sinalização de cálcio. Alterações na expressão de VSNL1/VILIP-1 e na homeostase do cálcio têm sido associadas à biologia de doenças neurodegenerativas e neuropsiquiátricas, dando suporte a estudos mecanísticos sobre vulnerabilidade neuronal e respostas ao estresse.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VILIP-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene VSNL1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do VSNL1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do VSNL1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VILIP-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de VSNL1 para a investigação da sinalização de VILIP-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) VSNL1 críticos para a função VILIP-1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos VSNL1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo VILIP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo VILIP-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus VSNL1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo VILIP-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR VILIP-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia VSNL1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo VSNL1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.