VE-cadherin Plasmide Double Nickase (m2): sc-419596-NIC-2
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- VE-cadherin Plasmide Double Nickase (m2) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il VE-cadherin Double Nickase Plasmid (m2) e il VE-cadherin Double Nickase Plasmid (m22) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cdh5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: VE-cadherin Antibody (F-8): sc-9989
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
VE-cadherin Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419596-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Cdh5 codifica la VE-caderina, una proteina delle giunzioni aderenti specifica dell’endotelio che media l’adesione omofilica cellula-cellula per mantenere l’integrità della barriera vascolare e la stabilità dei vasi. La VE-caderina si collega alle catenine e al citoscheletro di actina per coordinare il rimodellamento delle giunzioni durante l’angiogenesi e la polarizzazione endoteliale, e interagisce con la segnalazione VEGF/VEGFR2 e con le GTPasi della famiglia Rho per regolare la permeabilità e la transmigrazione dei leucociti. Una funzione deregolata di Cdh5/VE-caderina è implicata nella perdita vascolare patologica, nella disfunzione endoteliale associata all’infiammazione e nella neovascolarizzazione aberrante osservata nei microambienti tumorali e nelle retinopatie. L’editing genetico di Cdh5 nel topo consente studi meccanicistici di biologia endoteliale, inclusi l’analisi della dinamica delle giunzioni, saggi di gemmazione angiogenica e modelli in vivo di sviluppo vascolare e di compromissione della barriera.
VE-cadherin Il plasmide Double Nickase (m2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cdh5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cdh5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cdh5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cdh5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.