Partículas Lentivirales de Activación (h) VCAM-1: sc-400135-LAC

VCAM1 codifica la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1/CD106), un receptor inducible de la superfamilia de las inmunoglobulinas expresado en células endoteliales activadas, que media la adhesión firme y la transmigración de leucocitos mediante su unión a integrinas como VLA-4 (ITGA4/ITGB1). Su expresión se incrementa notablemente ante señales inflamatorias a través de programas regulados por NF-κB y por citocinas, vinculando la activación vascular con el reclutamiento de células inmunitarias, la remodelación de la barrera endotelial y las interacciones con la matriz extracelular. VCAM-1 participa en redes de señalización que coordinan la dinámica del citoesqueleto y la adhesión célula–célula durante las respuestas inflamatorias. La expresión desregulada de VCAM1 se asocia con inflamación crónica y disfunción vascular, y se estudia con frecuencia en contextos como la aterosclerosis, la patología autoinmune y el endotelio asociado a tumores.

Las partículas de activación lentiviral VCAM-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de VCAM1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral VCAM-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción VCAM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de VCAM-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo VCAM1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.