VAChT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401240

Übersicht

SLC18A3 kodiert den vesikulären Acetylcholin-Transporter (VAChT), ein Membranprotein synaptischer Vesikel, das Acetylcholin unter Ausnutzung des elektrochemischen Protonengradienten der Vesikel in sekretorische Vesikel lädt. Dieser vesikuläre Verpackungsschritt ist essenziell für die quantale cholinerge Neurotransmission an neuromuskulären Endplatten sowie in zentralen und peripheren cholinergen Schaltkreisen. Die VAChT-Funktion ist mit den Synthese- und Recyclingwegen von Acetylcholin verknüpft und koppelt den präsynaptischen Vesikelzyklus an die regulierte Exozytose und synaptische Signalübertragung. Ein veränderter cholinerger Tonus, der mit gestörter Acetylcholin-Speicherung zusammenhängt, wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen, autonomen Funktionsstörungen sowie Erkrankungen in Verbindung gebracht, die Motorik und Kognition betreffen.

Das VAChT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC18A3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC18A3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC18A3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VAChT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC18A3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VAChT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC18A3-Exone abzielen, die für die VAChT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC18A3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VAChT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VAChT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC18A3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VAChT HDR-Plasmid (h) und VAChT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC18A3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC18A3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.