UNC93B1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404369-ACT

UNC93B1（UNC93 homolog B1）は小胞体（ER）膜タンパク質で、TLR3、TLR7、TLR8、TLR9を含む核酸認識型Toll様受容体（TLR）の輸送およびシグナル伝達能を制御します。UNC93B1はこれらの受容体をERからエンドリソソーム系コンパートメントへシャペロンとして搬送することで、病原体由来および損傷関連の核酸に応答して下流で起こるI型インターフェロンおよびNF-κB経路の活性化閾値の設定に寄与します。UNC93B1の機能変化は、自然免疫によるセンシング、サイトカイン産生、抗原提示細胞の活性化を乱し、免疫恒常性の破綻や、感染に起因する炎症性表現型への感受性と関連づけられます。エンドソームTLRの局在（コンパートメント化）を制御する因子として、UNC93B1は単球、樹状細胞、B細胞、上皮細胞モデルなどで、自然免疫回路の解明を目的に頻繁に研究されています。

UNC93B1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UNC93B1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UNC93B1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UNC93B1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUNC93B1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UNC93B1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUNC93B1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUNC93B1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUNC93B1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUNC93B1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。