Ufc1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409943

Übersicht

UFC1 kodiert das E2-ähnliche konjugierende Enzym Ufc1, eine zentrale Komponente des UFM1-(Ubiquitin-fold Modifier 1)-Konjugationssystems, das die Ufmylierung von Proteinsubstraten vermittelt. Dieser Signalweg koordiniert die Proteostase am endoplasmatischen Retikulum (ER), die ER-Stress-Signalübertragung sowie Qualitätskontrollprozesse, die mit der Funktion des sekretorischen Weges verknüpft sind; zudem wurden Rollen in der ribosomenassoziierten Qualitätskontrolle und der zellulären Homöostase beschrieben. Störungen von Komponenten der Ufmylierung, einschließlich UFC1, wurden in experimentellen Modellen mit neurodevelopmentalen Phänotypen, hämatopoetischen Defekten und einer stressbedingten Anpassung von Krebszellen in Verbindung gebracht, was die Relevanz für die Krankheitsbiologie unterstreicht. UFC1 wird daher häufig in Kontexten untersucht, in denen ER-Funktion, Stressresilienz und Proteomerhalt Zellschicksalsentscheidungen beeinflussen.

Das Ufc1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UFC1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UFC1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UFC1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ufc1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UFC1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ufc1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf UFC1-Exone abzielen, die für die Ufc1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere UFC1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ufc1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Ufc1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UFC1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ufc1 HDR-Plasmid (h) und Ufc1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UFC1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UFC1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.