Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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UDP-GlcDH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423601
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- UDP-GlcDH El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico UDP-GlcDH, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: UDP-GlcDH Anticuerpo (B-4): sc-137058
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
UDP-GlcDH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423601 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Ugdh en el ratón codifica la UDP-glucosa 6-deshidrogenasa (UDP-GlcDH), una enzima citosólica que oxida la UDP-glucosa a ácido UDP-glucurónico, un precursor clave para la biosíntesis de glicosaminoglucanos y proteoglicanos. Esta reacción favorece el ensamblaje y la remodelación de la matriz extracelular al aportar sustratos para la producción de hialuronano y sulfato de condroitina/dermatán, influyendo en la adhesión celular, la migración y la morfogénesis tisular. La actividad de Ugdh también conecta el metabolismo de los carbohidratos con las vías de interconversión de azúcares UDP que determinan la composición del glucocálix y la señalización célula–célula. En modelos experimentales, la disponibilidad desregulada de ácido UDP-glucurónico y la glicosilación de la matriz se han asociado con programas de desarrollo alterados, cambios de la matriz tipo fibrosis y fenotipos de invasión relacionados con el cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO UDP-GlcDH (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ugdh en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ugdh junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ugdh tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UDP-GlcDH.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ugdh para la investigación de la señalización de UDP-GlcDH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ugdh críticos para la función de UDP-GlcDH
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ugdh para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido UDP-GlcDH CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UDP-GlcDH CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ugdh. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UDP-GlcDH (m) y el plásmido HDR UDP-GlcDH (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ugdh para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ugdh definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.