Plasmide CRISPR/Cas9 KO UDG (h): sc-403189

Présentation

UNG humain code l’uracile-ADN glycosylase (UDG), une enzyme clé de la réparation par excision de base qui initie l’élimination de l’uracile de l’ADN, généré par désamination de la cytosine ou par incorporation erronée de dUMP au cours de la réplication. En excisant l’uracile et en créant un site abasique destiné au traitement en aval, UNG contribue à préserver la stabilité du génome et à limiter la mutagenèse dans les génomes nucléaire et mitochondrial. L’activité d’UNG s’articule avec les réponses au stress réplicatif, la signalisation des dommages à l’ADN et les voies qui contrent les lésions induites par la désamination, notamment des processus pertinents pour la diversification des anticorps et la restriction innée de l’ADN rétroviral. Une dérégulation de la réparation de l’uracile et des intermédiaires de réparation associés a été reliée à une augmentation de la charge mutationnelle et à des phénotypes d’instabilité génomique étudiés en biologie du cancer, en immunologie et dans les interactions hôte–pathogène.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UDG (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UNG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UNG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UNG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UDG.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UNG pour l'étude de la signalisation de UDG, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UNG essentiels à la fonction de UDG
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UNG pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UDG plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UDG plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UNG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UDG plasmide HDR (h) et le UDG (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UNG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UNG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.