Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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UCH-L1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401088-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das UCH-L1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- UCH-L1 Double-Nickase-Plasmid (h) und UCH-L1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf UCHL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: UCH-L1: sc-271639
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
UCH-L1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401088-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UCH-L1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401088-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UCHL1 kodiert die Ubiquitin-C-terminale Hydrolase L1 (UCH-L1), ein in Neuronen stark angereichertes deubiquitinierendes Enzym, das die Ubiquitin-Homöostase aufrechterhält und über das Ubiquitin-Proteasom-System die Proteinkontrolle beeinflusst. Durch die Prozessierung von Ubiquitin-Konjugaten und die Regulation des Abbaus ausgewählter Substrate wirkt UCH-L1 auf synaptische Funktionen, die axonale Integrität und zelluläre Stressantworten und hat damit nachgelagerte Effekte auf Proteostase-Netzwerke. Eine Fehlregulation der UCHL1-Expression oder -Aktivität wurde mit neurodegenerativen Phänotypen und veränderter neuronaler Widerstandsfähigkeit in Verbindung gebracht; zudem wird UCH-L1 in Studien zur neuronalen Differenzierung und zu neuronalen Verletzungen häufig als Marker verwendet. Diese Eigenschaften machen UCHL1 zu einem relevanten Ziel, um Mechanismen zu untersuchen, die Deubiquitinierung, Proteomerhalt und neuronale Vulnerabilität miteinander koppeln.
UCH-L1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des UCHL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von UCHL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die UCHL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit UCHL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.