Ubr4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427303

Descripción general

Ubr4 codifica una ligasa E3 de ubiquitina de la familia N-recognina que respalda el control de calidad proteico al reconocer residuos N-terminales desestabilizantes y promover la degradación dependiente de ubiquitina. En células de ratón, UBR4 contribuye a la proteostasis, a la regulación de la estabilidad de complejos proteicos y a la coordinación de vías de degradación sensibles al estrés, conectándola con la biología más amplia del sistema ubiquitina–proteasoma y la vía de la regla del extremo N (N-end rule). También se han descrito funciones que vinculan a UBR4 con el tráfico de membranas y la homeostasis neuronal, lo que la hace relevante para estudios de mecanismos del neurodesarrollo y de neurodegeneración en los que se altera la señalización por ubiquitina y el mantenimiento del proteoma. Dado que la ubiquitinación se relaciona con el control del ciclo celular, la señalización y la organización del citoesqueleto, la perturbación de Ubr4 es útil para analizar cómo las ligasas de ubiquitina ajustan estos procesos en condiciones normales y asociadas a enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ubr4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ubr4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ubr4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ubr4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ubr4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ubr4 para la investigación de la señalización de Ubr4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ubr4 críticos para la función de Ubr4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ubr4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Ubr4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Ubr4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ubr4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ubr4 (m) y el plásmido HDR Ubr4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ubr4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ubr4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.