UBE2J1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405892

Panoramica

UBE2J1 codifica un enzima E2 coniugante l’ubiquitina ancorato al reticolo endoplasmatico (RE) che coopera con le ligasi E3 per ubiquitinare substrati mal ripiegati o regolati, destinandoli alla degradazione proteasomica. Opera nella degradazione associata al RE (ERAD), collegando il controllo qualità delle proteine all’attività del sistema ubiquitina–proteasoma e al mantenimento dell’omeostasi del RE durante lo stress cellulare. Modulando la proteostasi, UBE2J1 influenza vie correlate alla segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR), alla maturazione delle proteine secretorie e al turnover delle proteine associate alla membrana. La disregolazione dei componenti dell’ERAD, incluso UBE2J1, è rilevante per la ricerca su patologie caratterizzate da stress proteotossico e da un’alterata degradazione proteica mediata dall’ubiquitina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2J1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UBE2J1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UBE2J1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UBE2J1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UBE2J1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UBE2J1 per lo studio della segnalazione di UBE2J1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UBE2J1 critici per la funzione di UBE2J1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UBE2J1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UBE2J1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UBE2J1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UBE2J1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UBE2J1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UBE2J1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UBE2J1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UBE2J1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.