Plásmido Doble Nickase (m) UBE2F: sc-426826-NIC

El gen murino **Ube2f** codifica **UBE2F**, una enzima conjugadora E2 que favorece la neddilación al transferir **NEDD8** a las ligasas **cullin-RING**, con una fuerte vinculación al eje **CUL5–RBX2**. A través de esta vía, UBE2F contribuye a una modificación tipo ubiquitina que ajusta el reconocimiento y el recambio de sustratos, moldeando la proteostasis, la progresión del ciclo celular y la señalización adaptativa al estrés. La alteración de la neddilación dependiente de UBE2F puede modificar la actividad de las CRL y los programas transcripcionales y apoptóticos posteriores, lo que convierte a **Ube2f** en un nodo útil para estudiar la desregulación de la homeostasis proteica en contextos relevantes para el cáncer y la neurobiología. Por ello, en modelos murinos se analiza con frecuencia **Ube2f** para vincular la dinámica de la vía de NEDD8 con cambios en la amplitud de la señalización y la degradación selectiva de proteínas.

UBE2F El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ube2f en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ube2f. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ube2f. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ube2f alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.