Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (m) UBC13: sc-430050-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)UBC13 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa UBC13 (m) y el plásmido de doble nickasa UBC13 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Ube2n. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: UBC13 Anticuerpo (F-10): sc-376470
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) UBC13 | sc-430050-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) UBC13 | sc-430050-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ube2n codifica la enzima E2 conjugadora de ubiquitina UBC13, que cataliza la formación de cadenas de poliubiquitina enlazadas por K63 en colaboración con cofactores UEV como UBE2V1/UBE2V2. Esta señal de ubiquitinación no degradativa favorece el ensamblaje de complejos de respuesta al daño del ADN y regula la señalización inmunitaria innata a través de proteínas TRAF, contribuyendo a la activación de las vías NF-κB y MAPK. En sistemas murinos, los andamiajes de ubiquitina dependientes de UBC13 influyen en la estabilidad del genoma, el tono de la señalización inflamatoria y las respuestas celulares al estrés en linajes hematopoyéticos y estromales. La desregulación de estos procesos es relevante para estudios de disfunción inmunitaria, fenotipos inflamatorios aberrantes y susceptibilidad a patologías asociadas a la inestabilidad genómica.
UBC13 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ube2n en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ube2n. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ube2n. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ube2n alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.