Plásmido CRISPR de Activación (h) U1 SnRNP 70: sc-401829-ACT

SNRNP70 codifica U1 SnRNP 70, un componente central de la ribonucleoproteína nuclear pequeña U1 que reconoce los sitios de empalme 5′ e inicia el ensamblaje del espliceosoma durante el empalme del pre-ARNm. A través de sus interacciones con el snRNA de U1 y con otros factores del espliceosoma, U1 SnRNP 70 favorece una definición precisa de los exones, el procesamiento de ARN acoplado a la transcripción y la regulación global de programas de expresión génica. La disrupción de la función del espliceosoma y la selección alterada de sitios de empalme son características recurrentes de las respuestas celulares al estrés y de la reprogramación transcripcional oncogénica, lo que convierte a SNRNP70 en un nodo útil para estudiar el control del procesamiento de ARN. Los patrones de empalme aberrantes vinculados a perturbaciones del espliceosoma también son relevantes para la neurodegeneración y otras enfermedades en las que el metabolismo del ARN está comprometido, lo que impulsa estudios mecanísticos de las vías asociadas a U1.

U1 SnRNP 70 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SNRNP70 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

U1 SnRNP 70 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SNRNP70 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SNRNP70, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de U1 SnRNP 70. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SNRNP70 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de U1 SnRNP 70 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía U1 SnRNP 70 en células tumorales con expresión de SNRNP70 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.