Twinkle CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432601

Übersicht

Das Mausgen **Twnk** kodiert die mitochondriale DNA-Helikase **Twinkle**, ein im Zellkern kodiertes Enzym, das bei der Replikation die mtDNA entwindet und die Aufrechterhaltung der Kopienzahl des mitochondrialen Genoms unterstützt. Twinkle wirkt innerhalb des mitochondrialen Replisoms zusammen mit **POLG** und **mtSSB**, um die Fortschreitung der Replikationsgabel, die D-Loop-Dynamik und die gesamte mitochondriale Biogenese zu koordinieren. Eine Störung dieses Signalwegs beeinträchtigt die Kapazität der oxidativen Phosphorylierung, verändert die Organisation der mitochondrialen Nukleoide und kann kompensatorische Stressantworten auslösen, die den zellulären Stoffwechsel umgestalten. Eine **TWNK**-Dysfunktion ist mit mtDNA-Depletion und mehreren Phänotypen mitochondrialer Erkrankungen assoziiert, wodurch **Twnk** ein zentraler Lokus für die Modellierung mitochondrialer Genominstabilität in der biomedizinischen Forschung ist.

Das Twinkle CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Twnk-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Twnk-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Twnk nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Twinkle-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Twnk-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Twinkle-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Twnk-Exone abzielen, die für die Twinkle-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Twnk-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Twinkle CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Twinkle CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Twnk-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Twinkle HDR-Plasmid (m) und Twinkle HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Twnk-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Twnk-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.