Twinkle CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404159

Übersicht

TWNK kodiert Twinkle, eine mitochondriale DNA-Helikase, die für die Replikation der mtDNA und die Aufrechterhaltung der Nukleoide essenziell ist und zusammen mit dem mitochondrialen Replisom die Kapazität der oxidativen Phosphorylierung unterstützt. Durch das Entwinden doppelsträngiger mtDNA während der Replikation trägt Twinkle zur Erhaltung der mtDNA-Kopienzahl und der Genomintegrität bei und beeinflusst damit die mitochondriale Transkription, die Biogenese der Atmungskette sowie die zelluläre Energiehomöostase. Störungen von TWNK sind mit Instabilität des mitochondrialen Genoms verbunden, darunter mtDNA-Depletion oder multiple Deletionen, und werden mit neuromuskulären sowie neurodegenerativen Phänotypen mitochondrialer Erkrankungen in Zusammenhang gebracht. Loss-of-Function-Studien zu TWNK sind daher relevant, um mitochondriale Stresssignalwege, bioenergetisches Remodeling und Replikations-assoziierte mtDNA-Schadensantworten zu untersuchen.

Das Twinkle CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TWNK-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TWNK-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TWNK nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Twinkle-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TWNK-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Twinkle-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TWNK-Exone abzielen, die für die Twinkle-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TWNK-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Twinkle CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Twinkle CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TWNK-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Twinkle HDR-Plasmid (h) und Twinkle HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TWNK-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TWNK-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.