Plasmide CRISPR/Cas9 KO TWIK-2 (h): sc-407263

Présentation

KCNK6 code TWIK-2 (K2P6.1), un canal potassique à deux domaines « two-pore » qui contribue à la conductance de fond (fuite) des ions K+ et aide à déterminer le potentiel de membrane au repos ainsi que l’excitabilité membranaire. L’activité de TWIK-2 influence l’homéostasie ionique et la signalisation dépendante du calcium en modulant la polarisation cellulaire, avec des rôles rapportés dans la fonction du muscle lisse vasculaire, la biologie endothéliale et l’activation des cellules immunitaires. Par son effet sur les propriétés électriques et la signalisation en aval, TWIK-2 a été étudié dans des voies associées à la régulation du tonus vasculaire et aux réponses inflammatoires. Une dysrégulation de la fonction des canaux K2P, dont TWIK-2, est donc pertinente pour des investigations mécanistiques de l’hypertension, des dysfonctions vasculaires et de la physiopathologie à médiation immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TWIK-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNK6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNK6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNK6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TWIK-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNK6 pour l'étude de la signalisation de TWIK-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCNK6 essentiels à la fonction de TWIK-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNK6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TWIK-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TWIK-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNK6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TWIK-2 plasmide HDR (h) et le TWIK-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNK6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNK6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.