Particules Lentivirales d'Activation (h) TTP: sc-400722-LAC

Le gène humain ZFP36 code la tristetraproline (TTP), une protéine de liaison à l’ARN reconnaissant les éléments riches en AU, qui favorise une déadénylation et une dégradation rapides des ARNm afin de limiter l’expression des médiateurs inflammatoires et des gènes de réponse immédiate. TTP recrute le complexe CCR4–NOT et d’autres machineries de dégradation apparentées pour réguler le renouvellement des transcrits, modulant ainsi la signalisation de l’immunité innée, les réponses au stress et le contrôle par rétroaction de voies des cytokines telles que TNF/NF‑κB et MAPK. Une activité dérégulée de ZFP36/TTP est associée à une production aberrante de cytokines et à une inflammation chronique, et une expression altérée a été rapportée dans divers contextes de dysrégulation immunitaire ainsi que dans des phénotypes liés au cancer impliquant un contrôle post‑transcriptionnel. En tant que nœud des réseaux de stabilité des ARNm, ZFP36 est largement utilisé pour étudier la dégradation de l’ARN, les programmes d’activation des macrophages et le remodelage du transcriptome dépendant de la signalisation.

Les particules d'activation lentivirales TTP (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ZFP36 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TTP (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ZFP36, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TTP. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ZFP36 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.