Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPV5 (m): sc-431458

Présentation

Trpv5 code TRPV5, un membre de la famille des récepteurs potentiels transitoires de type vanilloïde hautement sélectif pour le calcium, qui fonctionne comme un canal d’entrée apical de Ca²⁺ dans les épithéliums. Dans le tube contourné distal et le tube connecteur du rein de souris, TRPV5 soutient la réabsorption transcellulaire du calcium et s’intègre au tamponnement médié par la calbindine ainsi qu’à l’extrusion basolatérale via NCX1 et PMCA, contribuant ainsi à l’homéostasie systémique du calcium. L’activité du canal est modulée par la rétroaction du Ca²⁺ intracellulaire, la signalisation des phosphoinositides, le pH et des régulateurs hormonaux, notamment la vitamine D et la PTH, reliant TRPV5 à la signalisation dépendante du Ca²⁺ et aux programmes de transport épithélial. La dysrégulation du transport dépendant de TRPV5 est pertinente pour l’étude de l’hypercalciurie, de la susceptibilité à la néphrolithiase et des phénotypes du métabolisme minéral dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPV5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Trpv5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Trpv5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Trpv5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRPV5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Trpv5 pour l'étude de la signalisation de TRPV5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Trpv5 essentiels à la fonction de TRPV5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Trpv5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRPV5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRPV5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Trpv5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRPV5 plasmide HDR (m) et le TRPV5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Trpv5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Trpv5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.