TRPC6 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423517-ACT

Trpc6 は、非選択性で Ca²⁺ 透過性をもつ陽イオンチャネル TRPC6 をコードしており、ホスホリパーゼ C（PLC）シグナル伝達の下流で機能して、受容体刺激を細胞内への Ca²⁺ 流入に結び付けます。マウス細胞では、TRPC6 は膜興奮性の調節、細胞骨格の再構築、機械刺激応答の制御に関与し、G タンパク質共役受容体およびチロシンキナーゼ受容体からのシグナルを統合します。チャネル活性は、カルシニューリン/NFAT や MAPK シグナル伝達などの Ca²⁺ 依存性経路に影響し、転写プログラムや細胞収縮性を形作ります。TRPC6 シグナルの破綻は、腎糸球体の生物学およびポドサイト機能に加え、血管・心臓のリモデリング過程とも関連づけられており、カルシウム駆動性の病態生理を研究するうえで重要です。

TRPC6 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Trpc6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRPC6 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Trpc6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTrpc6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRPC6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTrpc6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRPC6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTrpc6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRPC6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。