Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
TRP2/DCT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400334
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRP2/DCT Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TRP2/DCT, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRP2/DCT Antibody (C-9): sc-74439
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRP2/DCT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400334 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
DCT codifica la dopachrome tautomerase (TRP2/DCT), un enzima melanosomiale che catalizza la conversione del dopacromo in DHICA durante la biosintesi dell’eumelanina. Agendo a valle della tirosinasi e in coordinamento con TYRP1, TRP2/DCT sostiene la melanogenesi, la maturazione dei melanosomi e l’equilibrio redox nelle cellule produttrici di pigmento. La sua espressione è regolata da programmi trascrizionali di linea cellulare come MITF e interseca vie che controllano la pigmentazione e le risposte allo stress ossidativo. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di DCT sono state collegate a fenotipi di pigmentazione e sono frequentemente studiate nella biologia del melanoma e in contesti di presentazione dell’antigene.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRP2/DCT (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DCT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DCT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DCT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRP2/DCT.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DCT per lo studio della segnalazione di TRP2/DCT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DCT critici per la funzione di TRP2/DCT
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DCT per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TRP2/DCT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TRP2/DCT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DCT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TRP2/DCT Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TRP2/DCT (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DCT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DCT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.