Particules Lentivirales d'Activation (m2) Tropomyosin γ: sc-425595-LAC-2

Le gène murin Tpm3 code la tropomyosine γ, une protéine en hélice coiled-coil se liant à l’actine, qui polymérise le long de l’actine filamentaire afin de réguler la stabilité des filaments fins, l’accès de la myosine et la génération de force au sein de structures cytosquelettiques et contractiles. En définissant l’identité et la dynamique des filaments d’actine, TPM3 contribue à des processus tels que le contrôle de la forme cellulaire, l’adhésion, la migration et la mécanotransduction, en influençant le remodelage actomyosine dans les cellules musculaires et non musculaires. Une dérégulation de la fonction ou de l’expression de TPM3 a été associée à des défauts du cytosquelette et à des myopathies, et des événements de fusion impliquant TPM3 sont impliqués dans des contextes de signalisation oncogénique qui modifient des comportements dépendants de l’actine. La perturbation génétique de Tpm3 dans des modèles murins étaye des études mécanistiques de la régulation actine–myosine, de l’assemblage du sarcomère et des interactions entre voies du cytosquelette, au moyen de l’édition basée sur CRISPR et du phénotypage fonctionnel.

Les particules d'activation lentivirales Tropomyosin γ (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Tpm3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Tropomyosin γ (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Tpm3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Tropomyosin γ. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Tpm3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.