TRIP12 Double Nickase Plasmid (h): sc-403860-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TRIP12 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TRIP12 Double-Nickase-Plasmid (h) und TRIP12 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TRIP12 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRIP12 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403860-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRIP12 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403860-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIP12 kodiert eine E3-Ubiquitin-Protein-Ligase (auch ULF genannt), die die Ubiquitinierung von Substraten und deren proteasomalen Abbau fördert und dadurch die Proteinhomöostase sowie die Stärke zellulärer Signalwege mitprägt. TRIP12 ist an DNA-Schadensantworten und der Kontrolle des Zellzyklus beteiligt, indem es zentrale Checkpoint- und Tumorsuppressor-Signalwege reguliert, einschließlich der Modulation der Aktivität der p14ARF–MDM2–p53-Achse. Durch seinen Einfluss auf die ubiquitinabhängige Qualitätskontrolle trägt TRIP12 zur Genomstabilität und zur Anpassung an zellulären Stress bei. Veränderte TRIP12-Funktion oder -Expression wird mit dysregulierter Proliferation und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was TRIP12 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien in der Krebsbiologie und in neuronalen Modellen macht.
TRIP12 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TRIP12-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TRIP12 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TRIP12-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TRIP12-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.