TRIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423499

Übersicht

Traip kodiert TRIP, eine E3-Ubiquitin-Ligase, die an PCNA bindet und in der an die DNA-Replikation gekoppelten Aufrechterhaltung der Genomstabilität wirkt. TRIP trägt zur Stabilität der Replikationsgabel bei und koordiniert ubiquitinabhängige Antworten auf DNA-Schäden; dadurch unterstützt es die Auflösung von Replikationsstress und die Bewahrung der Chromosomenintegrität. In Maus-Zellen ist die TRAIP-Aktivität mit der Kontrolle des Zellzyklus-Fortschritts und der mitotischen Genauigkeit über Signalwege verknüpft, die sich mit DNA-Reparatur- und Ubiquitin-Signalen überschneiden. Störungen TRAIP-regulierter Prozesse sind relevant für Untersuchungen von Genominstabilitäts-Phänotypen, die mit Entwicklungsdefekten und Modellen der Krebsbiologie in Zusammenhang stehen.

Das TRIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Traip-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Traip-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Traip nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRIP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Traip-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRIP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Traip-Exone abzielen, die für die TRIP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Traip-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TRIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Traip-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRIP HDR-Plasmid (m) und TRIP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Traip-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Traip-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.