Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIP (m): sc-423499

Présentation

Traip code pour TRIP, une ligase E3 ubiquitine qui se lie à PCNA et intervient dans le maintien du génome couplé à la réplication de l’ADN. TRIP contribue à la stabilité de la fourche de réplication et coordonne des réponses dépendantes de l’ubiquitine aux dommages de l’ADN, favorisant la résolution du stress de réplication et la préservation de l’intégrité chromosomique. Dans les cellules de souris, l’activité de TRAIP est associée au contrôle de la progression du cycle cellulaire et à la fidélité mitotique, via des voies qui recoupent la réparation de l’ADN et la signalisation par l’ubiquitine. La perturbation des processus régulés par TRAIP est pertinente pour l’étude des phénotypes d’instabilité génomique associés à des anomalies du développement et à des modèles de biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Traip dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Traip, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Traip à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRIP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Traip pour l'étude de la signalisation de TRIP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Traip essentiels à la fonction de TRIP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Traip pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Traip. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRIP plasmide HDR (m) et le TRIP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Traip pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Traip définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.