Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRH-R1 (m2): sc-423506-KO-2

Présentation

Trhr code le récepteur 1 de l’hormone de libération de la thyréostimuline (TRH‑R1), un RCPG de classe A qui se lie à la TRH hypothalamique afin de réguler la signalisation de l’axe hypophyso‑thyroïdien et le contrôle neuroendocrinien du métabolisme. Après liaison du ligand, TRH‑R1 se couple principalement à Gq/11 pour activer la phospholipase C, entraînant la production d’IP3/DAG, la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et des programmes transcriptionnels dépendants de la protéine kinase C. Chez la souris, la signalisation de TRH‑R1 s’interface également avec les voies MAPK/ERK et influence l’excitabilité ainsi que la sécrétion hormonale dans les tissus sensibles à la TRH. La dérégulation de la signalisation TRH–TRH‑R1 a été associée à des modifications de la dynamique de la thyréostimuline (TSH) et à des phénotypes endocriniens et métaboliques plus larges, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques de l’homéostasie neuroendocrinienne.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRH-R1 (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Trhr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Trhr, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Trhr à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRH-R1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Trhr pour l'étude de la signalisation de TRH-R1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Trhr essentiels à la fonction de TRH-R1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Trhr pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRH-R1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRH-R1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Trhr. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRH-R1 plasmide HDR (m) et le TRH-R1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Trhr pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Trhr définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.