TREK-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-421244-LAC

O gene murino **Kcnk2** codifica o **TREK-1 (K2P2.1)**, um canal de potássio de dois poros (domínio de dois poros) que gera uma condutância de base de K+ para estabilizar o potencial de membrana em repouso e ajustar a excitabilidade celular. O TREK-1 é regulado por estiramento da membrana, temperatura, pH intracelular e sinalização lipídica, e é modulado por vias ligadas a GPCR, incluindo cAMP/PKA e sinalização mediada por fosfolipases. Ao moldar o disparo de potenciais de ação e a sinalização dependente de Ca2+, o TREK-1 influencia a transmissão sináptica, a mecanotransdução e a adaptação neuronal responsiva ao estresse. A atividade desregulada de KCNK2/TREK-1 tem sido associada na literatura à neurofisiologia e a fenótipos neurológicos, tornando-o relevante para estudos de excitabilidade, processamento da dor e sinalização associada à neuroinflamação.

As Partículas de Ativação Lentivirais TREK-1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Kcnk2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TREK-1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Kcnk2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TREK-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Kcnk2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.