Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAP100 (h): sc-417318

Présentation

MED24 code pour TRAP100, une sous-unité essentielle du complexe Mediator, qui fait le lien entre des facteurs de transcription spécifiques de séquence et l’ARN polymérase II afin de coordonner la communication promoteur–enhancer et l’initiation de la transcription. TRAP100 contribue à des programmes de régulation génique dépendants des signaux, notamment la transcription pilotée par les récepteurs nucléaires, ainsi qu’à un contrôle plus large, associé à la chromatine, de la progression du cycle cellulaire, de la différenciation et des réponses au stress. La perturbation de sous-unités de Mediator, dont MED24, peut dérégler des réseaux transcriptionnels associés à des anomalies du développement et à un remodelage oncogénique des programmes de transcription, faisant de MED24 un nœud d’intérêt pour étudier le contrôle de l’expression génique à l’échelle des voies. La fonction de MED24/TRAP100 est donc pertinente pour l’étude de la dérégulation transcriptionnelle en biologie du cancer et dans d’autres maladies dues à une altération des circuits de régulation génique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAP100 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MED24 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MED24, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MED24 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRAP100.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MED24 pour l'étude de la signalisation de TRAP100, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MED24 essentiels à la fonction de TRAP100
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MED24 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRAP100 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TRAP100 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MED24. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRAP100 plasmide HDR (h) et le TRAP100 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MED24 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MED24 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.