TPCN2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402960-ACT

TPCN2（two-pore segment channel 2）は、エンドリソソーム系に局在するカチオンチャネルをコードしており、NAADPおよび関連シグナルに応答して酸性の細胞内ストアからのCa²⁺放出を制御し、膜輸送、オルガネラの興奮性、ならびに小胞融合を協調的に調節します。エンドソーム—リソソーム動態とイオン恒常性を形作ることで、TPCN2はオートファジー、受容体リサイクリング、mTORシグナルに関連する栄養感知プロセスに影響を与えます。TPCN2活性の変化は、色素形成生物学、代謝表現型、細胞浸潤プログラムの変動と関連づけられており、リソソーム機能やストレス適応の研究において重要です。TPCN2を解析することは、ヒト細胞においてエンドリソソームCa²⁺シグナルが細胞骨格リモデリングやオルガネラ間クロストークとどのように接続しているかを解明する手がかりとなります。

TPCN2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TPCN2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TPCN2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TPCN2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTPCN2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TPCN2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTPCN2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTPCN2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTPCN2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTPCN2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。