TORC3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-413035-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TORC3O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase TORC3 (h) e o Plasmídeo Double Nickase TORC3 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CRTC3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TORC3 Anticorpo (A-12): sc-390712
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TORC3 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-413035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TORC3 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-413035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O CRTC3 (TORC3) humano é um coativador de transcrição regulado por CREB que integra a sinalização dependente de cAMP/PKA e de cálcio para modular programas de expressão gênica dirigidos por CREB. Sua atividade é regulada pelo sequestro citoplasmático dependente de fosforilação e pela translocação nuclear induzida por sinais, conectando vias de quinases a montante a saídas transcricionais envolvidas no equilíbrio energético, no metabolismo mitocondrial e na regulação de genes responsivos ao estresse. O CRTC3 contribui para a biologia de adipócitos e melanócitos e tem sido implicado em fenótipos metabólicos alterados e em estados transcricionais associados ao melanoma, tornando-o relevante para dissecar a regulação específica de contexto da via de CREB. Estudar a função do TORC3 ajuda a esclarecer como a sinalização por segundos mensageiros remodela redes transcricionais em cenários metabólicos e oncogênicos.
TORC3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CRTC3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CRTC3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CRTC3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CRTC3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.