TOM40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400967

概要

TOMM40 は、核コード型ミトコンドリアタンパク質の認識と輸入を担うミトコンドリア外膜トランスロカーゼ（TOM）複合体の、孔形成性 β バレルサブユニットである TOM40 をコードしている。前駆体タンパク質のミトコンドリア内への移行を制御することで、TOM40 は酸化的リン酸化、ミトコンドリアのプロテオスタシス、ならびにマイトファジーを含むストレス応答性の品質管理経路を支える。TOMM40 の機能や発現が変化すると、ミトコンドリアの生体エネルギー機能が乱れ、誤局在タンパク質の蓄積が促進されうることから、ミトコンドリア輸入の障害が神経変性疾患や代謝性疾患の機序と関連することが示唆される。TOMM40 遺伝子座の遺伝的多様性は、加齢関連表現型や神経疾患リスクとの関係で研究されており、関連する細胞モデルにおける機序解明の動機となっている。

TOM40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTOMM40遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TOMM40内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TOMM40のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TOM40タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TOM40シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TOMM40欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TOM40の機能に不可欠なTOMM40エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TOMM40ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TOM40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTOM40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TOMM40遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TOM40 HDRプラスミド（h）および TOM40 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTOMM40ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTOMM40標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。