TNF-R2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423443

Descripción general

Tnfrsf1b codifica TNF-R2 (TNFRSF1B), un receptor de TNF expresado predominantemente en poblaciones de células inmunitarias, endoteliales y ciertas células del estroma, que responde de forma preferente al TNF unido a membrana. La señalización de TNF-R2 recluta proteínas adaptadoras para regular la actividad de las vías de NF-κB y MAPK, configurando programas de supervivencia celular, respuestas de citocinas y remodelación tisular. En la biología de los linfocitos, TNF-R2 está estrechamente relacionado con la estabilidad de las células T reguladoras y con la señalización inducida por activación que modula el equilibrio inflamatorio. La desregulación del eje TNF-R2 se ha implicado en modelos de inflamación crónica, autoinmunidad y procesos neuroinflamatorios, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la especificidad de la vía del TNF.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TNF-R2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tnfrsf1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tnfrsf1b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tnfrsf1b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TNF-R2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tnfrsf1b para la investigación de la señalización de TNF-R2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tnfrsf1b críticos para la función de TNF-R2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tnfrsf1b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TNF-R2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TNF-R2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tnfrsf1b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TNF-R2 (m) y el plásmido HDR TNF-R2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tnfrsf1b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tnfrsf1b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.