Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMPRSS11E (h): sc-412014

Présentation

TMPRSS11E code une protéase à sérine transmembranaire de type II, exprimée à la surface des épithéliums, où la protéolyse péricellulaire peut réguler la fonction de barrière muqueuse, les interactions cellule–cellule et le remodelage du microenvironnement extracellulaire. En tant que membre de la famille des TTSP, TMPRSS11E est bien placée pour influencer la signalisation activée par les protéases ainsi que des événements de maturation protéolytique qui façonnent la différenciation épithéliale et les réponses inflammatoires. Une activité protéasique épithéliale dérégulée a été associée à la physiopathologie des voies aériennes et des épithéliums malpighiens, ce qui fait de TMPRSS11E une cible pertinente pour étudier les mécanismes sous-jacents aux réponses au stress épithélial et au remodelage tissulaire. Son architecture de protéase ancrée à la membrane permet d’explorer des réseaux protéasiques compartimentés à la surface cellulaire et leur impact sur les programmes de signalisation en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMPRSS11E (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMPRSS11E dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMPRSS11E, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMPRSS11E à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMPRSS11E.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMPRSS11E pour l'étude de la signalisation de TMPRSS11E, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMPRSS11E essentiels à la fonction de TMPRSS11E
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMPRSS11E pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMPRSS11E plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMPRSS11E plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMPRSS11E. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMPRSS11E plasmide HDR (h) et le TMPRSS11E (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMPRSS11E pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMPRSS11E définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.