TMPRSS11E Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412014

Panoramica

TMPRSS11E codifica una serin-proteasi transmembrana di tipo II espressa sulle superfici epiteliali, dove la proteolisi pericellulare può regolare la funzione della barriera mucosale, le interazioni cellula–cellula e il rimodellamento del microambiente extracellulare. Come membro della famiglia delle TTSP, TMPRSS11E è in una posizione tale da influenzare la segnalazione attivata da proteasi e gli eventi di processamento proteolitico che plasmano la differenziazione epiteliale e le risposte infiammatorie. Un’attività proteasica epiteliale deregolata è stata associata alla patobiologia delle vie aeree e degli epiteli squamosi, rendendo TMPRSS11E un bersaglio rilevante per studiare i meccanismi alla base delle risposte allo stress epiteliale e del rimodellamento tissutale. La sua architettura di proteasi ancorata alla membrana consente di indagare le reti proteasiche compartimentalizzate sulla superficie cellulare e il loro impatto sui programmi di segnalazione a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TMPRSS11E (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TMPRSS11E in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TMPRSS11E insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TMPRSS11E a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TMPRSS11E.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TMPRSS11E per lo studio della segnalazione di TMPRSS11E, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TMPRSS11E critici per la funzione di TMPRSS11E
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TMPRSS11E per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TMPRSS11E CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TMPRSS11E CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TMPRSS11E. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TMPRSS11E Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TMPRSS11E (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TMPRSS11E per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TMPRSS11E definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.