TMEM8C CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402487-ACT

TMEM8C, auch als Myomaker bekannt, kodiert ein multipassiges Transmembranprotein, das für die Fusion von Myoblasten während der Entwicklung und Regeneration der Skelettmuskulatur essenziell ist. Es wirkt an der Plasmamembran, fördert fusogene Aktivität und koordiniert myogene Regulationsnetzwerke sowie Membran-Remodelling-Prozesse, die für die Bildung mehrkerniger Myotuben erforderlich sind. Die Expression von TMEM8C ist eng an Differenzierungsprogramme in Muskelzellen gekoppelt und eignet sich daher als guter Ausgangspunkt, um die transkriptionelle Kontrolle der Myogenese und Mechanismen der Zell-Zell-Fusion zu untersuchen. Eine Fehlregulation der Myoblastenfusion und TMEM8C-assoziierter Signalwege ist relevant für experimentelle Modelle von Muskelschwund und erblichen Myopathien, bei denen eine beeinträchtigte Muskelbildung oder -reparatur ein zentrales zelluläres Merkmal darstellt.

TMEM8C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TMEM8C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TMEM8C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TMEM8C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TMEM8C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TMEM8C-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TMEM8C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TMEM8C-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TMEM8C-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TMEM8C-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.