TMEM70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412399

概要

TMEM70は、酸化的リン酸化複合体V（ATP合成酵素）の適切な組み立てと安定化に必要なミトコンドリア内膜タンパク質をコードしており、効率的なATP産生とミトコンドリアのエネルギー恒常性を支えます。TMEM70の欠失または機能不全は、プロトン共役型のATP合成を攪乱し、しばしばミトコンドリア膜電位の変化、呼吸鎖機能の破綻、そして代償的な代謝リモデリングを引き起こします。そのためTMEM70は、ヒト細胞におけるミトコンドリア生合成、バイオエネルゲティクス、およびミトコンドリア核連携（mitonuclear coordination）を研究するうえで有用な結節点となります。病原性TMEM70変異は、常染色体劣性のミトコンドリア疾患（脳心筋症や代謝破綻を伴う複合体V欠損症など）と関連づけられており、関連する細胞モデルでの機序解明研究を後押ししています。

TMEM70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTMEM70遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TMEM70内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TMEM70のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TMEM70タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TMEM70シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TMEM70欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TMEM70の機能に不可欠なTMEM70エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TMEM70ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TMEM70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTMEM70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TMEM70遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TMEM70 HDRプラスミド（h）および TMEM70 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTMEM70ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTMEM70標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。