TMEM55B Lentiviral Activation Particles (h): sc-410227-LAC

TMEM55B kodiert eine transmembrane Phosphoinositid-Phosphatase, die an der Regulation von Phosphatidylinositolphosphat-Pools beteiligt ist, welche Membranidentität und -transport steuern. Durch die Modulation der endosomalen und lysosomalen Phosphoinositid-Signalgebung kann TMEM55B die Vesikelreifung, die Sortierung von Fracht sowie autophagie-gekoppelte Membrandynamiken beeinflussen. Eine veränderte Phosphoinositid-Homöostase ist breit mit zellulären Stressantworten und fehlregulierter Wachstumssignalgebung verbunden, wodurch TMEM55B für Studien zur Organellenfunktion in krankheitsassoziierten Kontexten relevant ist. Seine Expression und Aktivität sind daher von Interesse für mechanistische Untersuchungen zu Membranumbau, Nährstoffsensorik und Signalweg-Crosstalk, der von kompartimentspezifischer Lipid-Signalgebung abhängt.

TMEM55B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TMEM55B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TMEM55B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TMEM55B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TMEM55B-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TMEM55B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.