Plásmido CRISPR de Activación (h) TMEM55B: sc-410227-ACT

TMEM55B codifica una fosfatasa transmembrana de fosfoinosítidos implicada en la regulación de la señalización de fosfatidilinositol al catalizar la desfosforilación de sustratos fosfoinosítidos, lo que influye en la identidad y el tráfico de membranas. Mediante la modulación de la composición lipídica de las membranas endosomales y lisosomales, TMEM55B se asocia con el transporte vesicular, el recambio de receptores y un control más amplio de la dinámica de la señalización intracelular. La homeostasis alterada de los fosfoinosítidos se relaciona con un crecimiento celular desregulado y respuestas al estrés, lo que hace que TMEM55B sea relevante para estudios de interacciones entre vías que pueden afectar fenotipos de proliferación y supervivencia. En sistemas de células humanas, la expresión y la actividad de TMEM55B ofrecen un punto de partida útil para investigar la regulación, impulsada por lípidos, de la función de los orgánulos y de las redes de señalización en contextos relevantes para la enfermedad.

TMEM55B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMEM55B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMEM55B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMEM55B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMEM55B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMEM55B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMEM55B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMEM55B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMEM55B en células tumorales con expresión de TMEM55B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.