TMEM45A Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-412437-LAC

TMEM45A codifica la proteina transmembrana 45A, una proteina di membrana multipasso ancora poco caratterizzata, arricchita negli epiteli ipossici e cheratinizzanti e collegata all’adattamento cellulare allo stress da bassa disponibilità di ossigeno. Le funzioni riportate collegano TMEM45A al traffico di membrana e all’organizzazione della via secretoria, con effetti a valle sui programmi di differenziazione epiteliale e sulle reti trascrizionali responsabili della risposta allo stress. Un’espressione alterata di TMEM45A è stata associata a cambiamenti nella sopravvivenza cellulare e in fenotipi invasivi in modelli tumorali, a sostegno della sua rilevanza nella segnalazione guidata dall’ipossia e nella plasticità epiteliale. Queste caratteristiche rendono TMEM45A un bersaglio utile per studiare le risposte allo stress del microambiente, la biologia dei tessuti di barriera e i meccanismi di regolazione genica nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TMEM45A (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TMEM45A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TMEM45A (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TMEM45A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TMEM45A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TMEM45A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.