Partículas Lentivirales de Activación (h) TMEM205: sc-408587-LAC

TMEM205 codifica una proteína transmembrana multipaso que se localiza en las membranas celulares y se ha implicado en la regulación del tráfico intracelular y de procesos de transporte asociados a la membrana. La alteración de la expresión de TMEM205 se ha vinculado a cambios en el manejo del estrés celular y en fenotipos de transporte de fármacos, lo que la hace relevante para estudios sobre adaptación de células tumorales y mecanismos de quimiorresistencia. Como proteína de membrana con anotación funcional limitada, TMEM205 se investiga con frecuencia mediante perturbaciones de la expresión para definir la conectividad de vías, incluidos efectos sobre la dinámica vesicular, la permeabilidad de membrana y los programas de respuesta celular. Estas características sitúan a TMEM205 como una diana útil para la genómica funcional en investigación de biología del cáncer y fisiología celular.

Las partículas de activación lentiviral TMEM205 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TMEM205 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TMEM205 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TMEM205, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TMEM205. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TMEM205 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.