Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMEFF1: sc-404818-ACT

Le gène humain **TMEFF1** (protéine transmembranaire avec un domaine de type EGF et deux domaines de type follistatine 1) code une protéine membranaire à passage unique impliquée dans les interactions avec des ligands extracellulaires et dans la modulation de la signalisation des facteurs de croissance. Les fonctions rapportées relient TMEFF1 à la régulation de la prolifération cellulaire et des programmes de différenciation, avec des effets dépendants du contexte sur des voies de récepteurs à activité tyrosine kinase telles que la signalisation EGFR/ERK et PI3K–AKT. L’expression de TMEFF1 est fréquemment dérégulée dans de nombreux types de tumeurs et a été associée à des modifications des états épithéliaux, de l’invasivité et de la signalisation du microenvironnement. Ces caractéristiques font de TMEFF1 une cible utile pour étudier l’intégration des signaux à la membrane plasmique et les conséquences transcriptionnelles des perturbations des voies de facteurs de croissance.

TMEFF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMEFF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEFF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMEFF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMEFF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEFF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMEFF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEFF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEFF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TMEFF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.