TM4SF1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404779-ACT

TM4SF1（transmembrane 4 L six family member 1）は、テトラスパニン様の細胞表面糖タンパク質で、主に内皮系および上皮系の環境で高発現し、細胞接着、運動性、ならびに細胞骨格リモデリングの制御に関与するとされています。膜マイクロドメインを組織化し、インテグリンや受容体型チロシンキナーゼからのシグナル出力を調節することで、細胞移動、細胞外マトリックスとの相互作用、血管新生プログラムに関連する経路に影響を与えます。TM4SF1の発現は、複数の疾患状況における浸潤性表現型や血管リモデリングと関連づけられており、微小環境に駆動される細胞挙動の変化を研究する上で有用なノードとなります。膜スキャフォールドタンパク質として、TM4SF1は細胞—細胞および細胞—マトリックス間コミュニケーションと、それに続く転写応答への寄与という観点からもしばしば検討されます。

TM4SF1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TM4SF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TM4SF1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TM4SF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTM4SF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TM4SF1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTM4SF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTM4SF1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTM4SF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTM4SF1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。