Plásmido CRISPR de Activación (h) TLX3: sc-405569-ACT

TLX3 (homeobox 3 de leucemia de células T) es un factor de transcripción homeobox que regula programas de expresión génica dependientes del contexto durante el desarrollo y la especificación de linajes, con funciones destacadas en la diferenciación hematopoyética y neuronal. Al unirse a motivos específicos de ADN mediante su homeodominio, TLX3 puede reorganizar redes transcripcionales que influyen en decisiones de destino celular, el control de la proliferación y el estado de maduración. La expresión desregulada de TLX3 se asocia con programas de diferenciación alterados y señalización transcripcional aberrante observada en modelos de neoplasias hematológicas, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la biología de los factores de transcripción oncogénicos. En sistemas celulares, la perturbación de TLX3 se investiga con frecuencia para cartografiar genes diana aguas abajo, estados epigenéticos y la interconexión entre vías que gobiernan fenotipos relevantes para el desarrollo y la enfermedad.

TLX3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TLX3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TLX3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TLX3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TLX3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TLX3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TLX3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TLX3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TLX3 en células tumorales con expresión de TLX3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.