Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Thy-1/CD90 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423390-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Thy-1/CD90 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Thy-1/CD90ダブルニカースプラスミド（m）およびThy-1/CD90ダブルニカースプラスミド（m2）は、Thy1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Thy-1/CD90 抗体 (OX7): sc-53116
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Thy-1/CD90 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-423390-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Thy-1/CD90 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-423390-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Thy1 は、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の細胞表面糖タンパク質である Thy-1/CD90 をコードしており、マウスではニューロン、線維芽細胞、間葉系ストローマ細胞、および一部の T 細胞サブセットに共通する保存性の高いマーカーとして知られています。Thy-1 はインテグリンやシンデカンなどの結合相手を介して細胞—細胞間および細胞—細胞外マトリックス間の相互作用に関与し、フォーカルアドヒージョンの動態、細胞骨格の再構築、メカノトランスダクションに影響を与えます。これらの過程を通じて、神経突起の伸長、軸索誘導、免疫細胞の活性化を調節し、Thy-1 シグナルを組織リモデリングや炎症性シグナルと結び付けています。Thy-1 の発現異常は、線維化様のストローマ活性化、神経炎症、腫瘍微小環境の表現型と関連づけられており、接着依存的シグナル伝達や系譜アイデンティティの研究において重要な分子です。
Thy-1/CD90 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Thy1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Thy1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Thy1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Thy1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。