TGFβ3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400768-ACT

TGFB3 codifica il transforming growth factor beta 3 (TGFβ3), una citochina secreta della superfamiglia TGF-β che segnala principalmente attraverso TGFBR1/2 per attivare SMAD2/3 e modulare programmi trascrizionali che controllano proliferazione, differenziamento, rimodellamento della matrice extracellulare e regolazione immunitaria. TGFβ3 interagisce anche con vie non canoniche, incluse le cascate di segnalazione MAPK, PI3K/AKT e delle GTPasi di tipo Rho, influenzando la transizione epitelio-mesenchimale, la riparazione delle ferite e l’omeostasi tissutale. Una disregolazione della segnalazione TGFB3/TGF-β è implicata nel rimodellamento associato alla fibrosi, in alterazioni del patterning dello sviluppo e nelle dinamiche del microambiente tumorale, dove segnali modificati possono plasmare le risposte stromali e l’immunosoppressione. Queste funzioni rendono TGFB3 un nodo chiave per studiare, in sistemi umani, la regolazione dipendente dal contesto del destino cellulare e della biologia della matrice.

TGFβ3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TGFB3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TGFβ3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TGFB3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TGFB3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TGFβ3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TGFB3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TGFβ3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TGFβ3 nelle cellule tumorali con espressione di TGFB3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.