TFIIIC220 Double Nickase Plasmid (h): sc-404920-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TFIIIC220 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TFIIIC220 Double-Nickase-Plasmid (h) und TFIIIC220 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GTF3C1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TFIIIC220: sc-398780
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TFIIIC220 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404920-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFIIIC220 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404920-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF3C1 kodiert TFIIIC220, die größte Untereinheit des TFIIIC-Komplexes, der interne Promotorelemente in Genen erkennt, die von der RNA-Polymerase III transkribiert werden, darunter tRNAs und andere kleine nichtkodierende RNAs. Durch Promotorbindung und Rekrutierung von TFIIIB unterstützt TFIIIC220 den Aufbau des Pol-III-Präinitiationskomplexes und reguliert die Transkriptionsleistung, die mit der Translationskapazität, der Stressanpassung und dem Fortschreiten des Zellzyklus verknüpft ist. TFIIIC trägt außerdem zur höhergeordneten Genomorganisation bei, indem es mit Chromatin und Grenzelementen assoziiert und so die Pol-III-Transkription mit der nukleären Architektur verbindet. Eine Fehlregulation der Kontrolle der Pol-III-Transkription und der TFIIIC-Funktion wird häufig in Zusammenhängen untersucht, in denen veränderte Proliferationsprogramme, Genomstabilität und Transkriptions-Rewiring beobachtet werden, etwa in Krebs- und Entwicklungsdiseasemodellen.
TFIIIC220 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GTF3C1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GTF3C1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GTF3C1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GTF3C1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.